|
中国人民解放军二O二医院 李民
沈阳药学院药理教研室 苏兴仁
鸦胆子是苦木植物鸦胆子Brucea javanical(L)Merr的成熟果实。五十年代曾报道鸦胆子油对外耳道乳头瘤有一定的疗效。药理实验证明鸦胆子油对艾氏腹水癌、S37、S180等有明显抗癌活性，其药代动力学规律及其对艾氏腹水癌细胞DNA合成的影响亦已报道。本文研究了鸦胆子油乳剂对艾氏腹水癌细胞的杀伤力动力学效应。
实验材料
1、鸦胆子油乳剂：含鸦胆子油10％，以豆磷脂作乳化剂，经高压乳化而得。
2、3H-TdR：放射活性为18Ci/mM。
3、核-4型乳胶。
4、接种7天的艾氏腹水癌小鼠。
5、秋水仙碱胺。
方法和结果
一、对S期细胞的影响
（一）取接种艾氏腹水癌7天后的小鼠，腹腔注射3H-TdR20μCi/只半小时后，再经腹腔注射鸦胆子油乳剂0.20mg/只。注药后经1/2、1、2、4、6、8、12、24小时取腹水涂片，作分裂指数的观察，统计1000个细胞，求出分裂指数。作放射自显影观察的，统计每500个细胞中标记细胞及非标记细胞损伤百分率。同时统计各时相的标记指数。注药后4小时内有少量细胞出现膜破溃，6小时后发现部分细胞核膜破裂、核碎裂，整个细胞瓦解。注药后4小时标记细胞（S期细胞）三损伤率为8.7％，非标记期（其他期细胞）的损伤率为5.5％，注药后8小时，前者达22.4％，后者为8.5％；至24小时前者为1.1％，后者近于零。实验发现，给药后8小时，S期细胞及其他期细胞的损伤均呈现高峰，然后逐渐下降。
注射3H-TdR20μCi/只后0时的LI为24％，给药后4小时下降为12.5％，至24小时下降至5.2％。由此可见，鸦胆子油乳剂对处于S 期的细胞具有明显的抑制作用。注药前，艾氏腹水癌细胞MI为1.2％；给药后MI下降，1小时后0.86％，2小时下降最显著，为0.65％，4小时开始恢复，至24小时上升至1.1％。
（二）取接种艾氏腹水癌小鼠8只，分成两组。腹腔注射3H-TdR20μCi/只后半小时，取腹水涂片。此时两组动物立即腹腔注射秋水仙酰胺μg/只，经半小时后实验组动物腹腔注射鸦胆子油乳剂0.20mg/只，对照组动物给予生理盐水。在给秋水仙酰胺后1、2、3、4、5小时取腹水涂片，作放射自显影，统计100个有丝分裂相的标记分裂指数（PLM）。
实验发现，对照组动物在注入秋水仙酰胺后1小时PLM为16％。随时间延长，PLM上升幅度增大，5小时PLM为89％。实验组1小时PLM为7％，5小时为41％，与对照组比较，PLM值上升幅度不大。
二、对G2期及M期细胞的影响
取荷瘤小鼠16只，分为四组：（一）对照组。（二）秋水仙酰胺组，每只动物腹腔注射20μg。（三）秋水仙酰胺加鸦胆子油乳剂组。（四）鸦胆子油乳剂组，每只动物腹腔注射0.20mg。以上四组动物均于给药前取腹水涂片，注药后2、4、8小时各取一次腹水涂片，计数1000个细胞，统计MI，每组取4只动物的平均值。
实验发现，对照组的MI在8小时内变化不大，波动于3.0～3.2％之间。秋水仙酰胺组在0时MI为3.5％，8小时上升为27.5％，表明艾氏腹水癌细胞分裂被秋水仙酰胺阻断于中期，MI随时间而上升。鸦胆子油乳剂组在0时MI为3.3％，2小时为3.4％，8小时为5.4％，呈现明显抑制。秋水仙酰胺加鸦胆子油乳剂组，在0时MI为3.2％，2小时为4.1％，8小时上升至10.6％，比秋水仙酰胺组相应时间的MI为低，但较鸦胆子油乳剂组MI为高。
三、对G0期细胞的影响
取荷瘤小鼠10只，每隔2小时腹腔注入3H-TdR20μCi/只，连续进行18小时，共注射10次。在0、6、10、14、16、18小时注射3H-TdR20μCi/只之后0.5小时分别取腹水涂片。在最后一次取腹水后，由腹腔注射鸦胆子油乳剂0.2mg/只，经1、2、3、4、5、6小时取腹水涂片，作放射自显影，统计各时相的LI。
实验发现，0小时LI为12％，以后随时间延长而呈直线上升，但经过连续18小时注入3H-TdR，LI曲线近于水平。18小时LI为52.2％，表明未被标记的细胞为47.8％，故将尚未标记的细胞视为G0期细胞，统计500个细胞中G期细胞的损伤百分率。鸦胆子油乳剂对艾氏腹水癌细胞G0期细胞在1小时杀伤率为9％至5小时为17％。
四、在体内对DNA生物合成的影响
取荷瘤小鼠24只，分成两组，实验组动物于腹腔注入鸦胆子油乳剂0.20mg/只，对照组给予生理盐水，均分别于0.5、2、4、6、12、24、48小时腹腔注射3H-TdR20μCi/只，1小时后取腹水涂片，作放射自显影，统计TI。鸦胆子油乳剂能够明显抑制艾氏腹水癌细胞DNA合成，给药后0.5小时LI为11％，在4小时内未见明显上升，6小时为19％，48小时为41％，各时相的LI与对照组比较均为明显降低。
讨论
鸦胆子油乳剂对艾氏腹水癌细胞增殖周期具有一定影响。由S期杀伤结果可知，给药后8小时，S期及非S期细胞的损伤均呈现高峰，但S期细胞的损伤百分率较非S期细胞损伤率为高。LI在2小时后明显下降，到给药后24小时LI降为5.2％，表明给药时处于S期的细胞大部分被药物破坏。经3H-TdR标记后，再用秋水仙酰胺阻断的实验所见，给药组PLM值上升幅度与对照组比较明显下降，这与药物可大量杀伤S期细胞的结果相吻合。
由秋水仙酰胺阻断结合药物杀伤的结果看到，鸦胆子油乳剂作用后8小时，MI由0时的3.2％上升到10.6％，在10.6％中包括有S期、进入S期、进入M期的细胞，但大部分细胞由于损伤或受到阻抑而未能进入M期。而单独给予鸦胆子油乳剂，MI由0时的3.3％至8小时仅上升为5.4％；表明MI收到明显抑制。由于药物处理时几乎未见损伤的M期细胞，并可见有丝分裂各期的细胞，所以经药物处理后MI无明显上升并非药物直接损伤M 期细胞所致，说明鸦胆子油乳剂可以抑制或损伤G2期细胞，从而减少及延长了G2期细胞进入M期。
综上所述，鸦胆子油乳剂对艾氏腹水癌细胞G0、S、G2期细胞均有一定损伤或抑制作用，因而可能属于细胞周期非特异性药物。 | 
